earticle

영어

Human liver cytochrome P450 (CYP450) isozymes are principle drug-metabolizing enzymes. The US FDA and EU EMA guidelines suggest that along with enzyme activity measurements, mRNA expression levels could be used to evaluate CYP450 enzyme induction. We evaluated the potential induction ability of Bosentan, as a pulmonary arterial hypertension drug, on CYP450 isozymes (CYP1A2, 2B6 and 3A4) using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Bosentan treatment increased CYP3A4 mRNA expression in HMC478, HMC923 cell, and it were at least 10 times higher than enzyme activity of that. CYP2B6 mRNA expression was induced in HMC478. CYP450 metabolism was established In vitro by determining enzymatic activity using LC-MS/MS which involves a complex method and utilizes expensive equipment. However, qRT-PCR is a simple and sensitive method for monitoring changes in mRNA expression. Therefore, we thought that mRNA expression measurement is a useful tool for detection of CYP450 isozymes induction.

한국어

사람의 간에 존재하는 cytochrome P450 (CYP450)은 약물 대사에 관여하는 중요한 효소이다. 따라서 미국 FDA 와 EU EMA 가이드라인에서는 CYP450 유도능 평가 시 효소활성측정법과 더불어 유전자발현측정법을 이용할 것을 권장하고 있다. 본 연구에서는 LC-MS/MS와 qRT-PCR을 이용하여 폐동맥 고혈압 치료제인 bosentan의 CYP450 동질 효소(CYP1A2, 2B6, 3A4)에 대한 유도능을 평가하였다. Bosentan에 의해 478과 923 두 도너의 CYP3A4 mRNA 발 현량이 크게 증가하였고, 효소활성에 비해 923 도너의 유도능이 10배 이상 증가하였다. CYP2B6에서도 478 도너에 서 mRNA 발현량이 크게 증가하였다. 효소활성측정법은 복잡한 분석 방법과 LC-MS/MS 장비를 필요로 하나, 유전 자발현측정법은 실험과정이 간편하고, 민감도가 높으며 mRNA 발현량 변화를 직접적으로 확인할 수 있다는 장점을 가지고 있다. 그러므로, 유전자발현측정법은 CYP450 유도능 평가에 유용한 측정법으로 이용될 수 있을 것으로 기대 된다.