earticle

영어

The cholesterol oxidase was purified from the culture broth of Rhodococcus sp. 3T6-5Mj strain by procedures involving filtration, acetone precipitation, DEAE-Sephadex A-50, and cholesterol affinity column chromatography with a recovery of 15% to specific activity of 25.6 units/mg. The molecular weight of the enzyme was estimated to be 52,000 daltons by SDS-PAGE. Optimum pH and temperature for the enzyme activity were approximately pH 7.0 and 50℃ respectively. The Michaelis constant (Km) for cholesterol was found to be 3.2x10-4M. The enzyme showed a high substrate specificity for 3B-hydroxysterols and the relative oxidation rates were 100% for cholesterol, 89% for campesterol, 55% for stigmasterol, etc. Amino acid analysis showed that the enzyme protein was composed of 440 amino acid residues without cystein and tryptophan.

한국어

Rhodococcus sp. 3T6-5Mj 균주의 배양액으로부터 0.2um membrane filter을 통과시키고, 아세톤 침전, DEAE-Sephadex A-50 column chromatography의 약음이온 교환수지,cholesterol affinity column chromatography를 통과시켜서 콜레스테롤 산화 효소를 25.6units/mg의 비활성도, 15%의 회수율,88배로 정제할 수 있었다. 본 균주가 생산하는 콜레스테롤산화효소의 분자량은 SDS-PAGE로 측정한 결과 약,52,000 daltons 정도로 추정되었다. 그리고 이 효소의 Km값은 콜레스테롤을 기질로 측정하였을 때3.2x10-4M 이었다. 본 효소의 최적온도는 50℃ 최적 pH는 7.0으로 나타났으며, 열에 대한 안정성은 30~45℃,pH에 대한 안정성은 6.5~11.0으로 나타났다. 본 효소는 cholesterol, campesterol, stigmasterol, hecogenin, Bm-sistosterol의 기질에 특이성을 나타내었다. 본 효소의 아미노산 440개의 잔기로 이루어져 있으며,그 아미노산 조성은 aspararine/aspartate > glutamine/glutamate > proline > alaline > histidine 의 순으로 나타났다. 본 효소는 효소적 혈중 콜레스테롤의 측정방법에 필수적인 콜레스테롤 산화 효소의 이용 가능성을 보여 주었다.용 가능성을 보여 주었다.