원문정보
Isolation and Purification of Methyl Mercaptan Oxidase from Thiobacillus thiooxidans for Detection of Mercaptans
초록
영어
Methyl mercaptan oxidase was isolated and purified from Thiobacillus thiooxidans KCTC2505 for the detection of mercaptans. The procedure of purification involved DEAE-Sephacel and Superose 12 column chromatographies with recovery yields of 40 and 6.3%, and specific activity of 19.7 and 80.1 units/mg-protein, respectively. The molecular weight of purified methyl
mercaptan oxidase was determined to be 68.1 kDa by SDS-PAGE. The extract from DEAE-Sephacel column chromatography had a high activity in oxidizing methyl mercaptan to produce formaldehyde which can be easily detected by purpald-coloring method. Optimum temperature for activity was observed at 43℃. This enzyme was activated by NH4Cl and (NH4)2SO4, and
inhibited by KCl and NaCl.
한국어
Thiobacillus thiooxidans KCTC2505에서 메칠머캅탄(MM) 가스를 기질로 메칠머캅탄 산화효소(MMO)를 유도할 수 있었으며 DEAE-Sephacel과 Superose 12 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다. 이때 얻어진 각 효소의 비활성은 각각 19.7과 80.1 units/mg-protein이었으며 효소의 최적 온도는 43 oC였다. 상기 정제된 효소액은 SDS-PAGE상에서 68.1 kDa의 분자량을 가진다. 이 효소는 암모늄염의 존재하에서는 활성이 증가하였으나 KCl 존재하에서는 감소하였으며 NaCl에 대해서는 거의 영향을 받지 않는 특성을 가지고 있다. 에탄올, 메탄올, 글리세린의 첨가에 대해 효소활성은 부분적으로 불활성화되었으며 아세톤의 경우에는 완전히 저해되었다. Purpald 발색법을 이용한 흡광도의 변화는 구강내 존재하는 MM 가스로부터 생성될 수 있는 수 십 nmol의 범위의 포름알데하이드에 대해 눈으로 인지가능한 발색시스템에 사용할 수 있음을 확인하였다.
목차
서론
재료 및 방법
시약 및 균주
균주 배양 및 효소액의 제조
효소활성 측정 및 발색조건
SDS-PAGE
효소의 활성에 미치는 염과 유기용매의 영향
결과 및 고찰
배양 특성
효소의 정제 및 특성
요약
감사
REFERENCES