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영어

Characteristics of human β-carotene 15,15'-dioxygenase isolated by recombinant DNA technology was elucidated. Optimal pH and temperature were 9.0 and 40℃, respectively. Enzyme activity was temperature-sensitive. Enzyme was stable at pH 6.0-9.0 for 24 hr and under 5℃. Half-life of enzyme at 35℃ was 40 min. Crude preparations of enzyme were inhibited by ferrous ion-chelating agent and sulfhydryl-binding agent. GSH offsets inhibitory effect of PCMB. With increasing substrate concentrations, enzyme activity gave typical Michaelis-Menten curve, Based on Hanes-Woolf plot of data, Km and Vmax were 3.39×106 M and 1.2 pmol/mg protein/min, respectively.

한국어

본 연구에서는 유전자 재조합 기술에 의해 제조된 β-carotene 15,15'-dioxygenase의 반응특성 및 효소 kinetics를 규명하였다. β-carotene 15,15'-dioxygenase 효소반응을 위한 최적 온도 및 pH를 측정한 결과, 최적 온도는 40℃로 판명되었으며 최적 pH 는 9.0이었다. 저장 pH 6.0-9.0 범위에서 안정하였으며, pH 11에서도 80% 이상의 활성을 보이는 호알칼리성 효소임을 확인하였다. 온도 저장성을 확인한 결과, 35℃에서의 효소활성 반감기가 40분으로서 열에 민감한 것으로 판단되었다. 한편, ferrous ion-chelating agent와 sulfhydryl-binding agent를 사용하여 β-carotene 15,15'-dioxygenase에 미치는 영향을 살펴 보았다. Ferrousion-chelating agent인 α,α'-dipyridyl과 1,10-phenanthroline은 1×10-4 M에서 최소 저해농도를 형성하였으며, sulfhydryl-binding agent인 iodoacetamide와 PCMB는 1×10-3 M에서 N-ethylmaleimide은 1×10-4 M에서 최소저해농도를 형성함을 확인할 수 있었다. 본 연구에서의 효소반응은 Michaelis-Menten 곡선을 따름을 확인하였으며, Hanes-Woolf 작도법에 따른 결과, β-carotene 15,15'-dioxygenase 효소의 Km 및 Vmax 값은 각각 3.39×10-6 및 1.2 pmol/mg protein/min인 것으로 산출되었다.