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영어

Amphibian populations are experiencing unprecedented declines, necessitating the development of ex situ conservation strategies such as sperm cryopreservation. This study aimed to establish optimal cryopreservation protocols for two Korean salamander species, Hynobius leechii and H. unisacculus. We evaluated the effects of two cryoprotectants (CPs) —dimethyl sulfoxide (DMSO) and N,N-dimethylformamide (DMF)—at three final concentrations (5%, 10%, and 15%), each combined with 0.6 M sucrose, and two cooling rates (fast at 5 cm vs. slow at 10 cm above LN₂). Post-thaw sperm survival was assessed using a LIVE/DEAD viability assay. The optimal conditions were found to be species- specific. For H. leechii, the highest mean survival (42.5%) was achieved with 10% DMF and a fast cooling rate. For H. unisacculus, the optimal condition was 5% DMF with a fast cooling rate, yielding 38.1% survival. A fast cooling rate was consistently superior for both species. These results highlight that even closely related species require tailored cryopreservation methods. The species-specific protocols developed in this study provide a standardized foundation for gene banking and can be immediately utilized in conservation programs to preserve the genetic diversity of threatened amphibians.

한국어

전 세계적인 양서류 감소 위기에 대응하여 서식지 외 보전 전략, 특히 정자 동결보존 기술의 중요성이 커지고 있다. 본 연구는 한국 도롱뇽류인 도롱뇽(Hynobius leechii)과 꼬마 도롱뇽(H. unisacculus)을 대상으로 최적의 정자 동결보존 프로토콜을 확립하고자 하였다. 동결보존제의 농도와 냉각 속도를 조합하여 해동 후 정자 생존율을 분석한 결과, 최적 조건은 종에 따라 다르게 나타났다. 도롱뇽은 10% DMF와 빠른 냉각(액체질소 표면 위 5 cm) 조합에서 42.5%로 가장 높은 평균 생존율을 보였고, 꼬마도롱뇽은 5% DMF와 빠른 냉각 조합에서 38.1%의 최고 평균 생존율을 기록했다. 이러 한 결과는 근연종이라도 종 특이적인 정자 동결보존 조건 확 립이 필수적임을 보여준다. 본 연구에서 개발된 표준화 프로 토콜은 멸종위기 양서류의 유전적 다양성 보존을 위한 실질 적인 지침으로 즉시 활용될 수 있을 것이다.