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한 종의 생태적 지위를 파악하는 것은 대상종이 생태계에서 어떤 역할을 수행하는지 알 수 있으 며, 나아가 생태계 보전과 복원에 중요한 기초 자료로 활용될 수 있다. 실뱀(Orientocoluber spinalis )은 대한민국 전역에 분포한다고 알려져 있으나, 민첩하며 발견빈도가 높지 않아 생태적 지 위, 이동권, 행동 특성, 등 기본적인 생태 정보가 부족한 실정이다. 실뱀의 생태적 지위를 파악하기 위하여 먹이그물 속 실뱀의 포식 및 피식 역할에 대한 연구가 필요하다. 기존의 먹이원 연구는 개체 를 포획하여 구토를 유도하거나 위장을 절개하여 먹이원을 동정하는 방식이 주로 수행되었다. 그러 나 위 방법은 연구종에게 미치는 부정적인 영향(스트레스, 생존능력 저하, 사망 등)이 크기 때문에 최근에는 스트레스를 최소화하는 비침습적 연구방법이 사용되고 있으며 그중 하나로 분변을 이용한 먹이원 분석방법이 사용되고 있다. 그러나, 분변에 포함된 유전정보 중 가장 양이 많고 상태가 온전 한 것은 포식자 자체의 DNA이며 효율적인 분변 내 먹이원 DNA의 증폭을 위해서는, 포식자 DNA 의 증폭을 억제하는 블로킹프라이머(blocking primer) 개발이 필요하다. 개발을 위하여 실뱀과 실 뱀의 동소종 및 먹이원으로 예상되는 양서류, 설치류, 파충류 총 15종을 선정하고, 이들의 12S 서열 과 기존에 개발된 척추동물 범용프라이머 서열 비교를 통하여, 블로킹프라이머를 제작하였다. 현재, 블로킹프라이머의 최적반응 조건 탐색 및 실뱀, 동소종 및 먹이원 예상 종들의 DNA를 추출하여, 블 로킹프라이머의 특이성 및 효율성 검증을 진행하고 있다. 현재의 결과를 바탕으로 개발한 블로킹프 라이머를 이용하여 분변으로부터 먹이원 DNA를 증폭하여, NGS 분석방법과 클로닝 방법을 상호 비 교하여, 실뱀 먹이원 분석의 효율적 방법고안 및 실질적 먹이원 분석을 수행할 예정이다. 본 연구는 연구재단의 지역대학우수과학자지원사업(2020R1I1A3051885)의 지원을 받아서 수행되었다.