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칡소는 이모색을 가진 한우의 한 갈래로 한우로 등록되고 있으며, 육종을 위한 개체 선 발을 위하여 증식을 실시하고 있다. 이를 위하여 동결 정액 생산이 지자체를 중심으로 이루어지고 있으며, 근친을 막기 위한 정액 교환이 활발하게 이루어져지고 있다. 동결정 액의 생산은 유전자원을 확보하는 가장 기본적인 기술로 그 중요도가 높으며, 인공수정 과 체외수정에 필요한 정액을 안정적으로 공급할 수 있다. 그럼에도 불구하고 칡소의 경 우, 동결 정액의 생존성 및 활력도가 균일하지 못한 것이 현실이며, 이는 개체와 실험자 의 기술적 차이에 의한 것으로 판단된다. 본 연구에서는 칡소 동결정액의 생산 효율성을 높이기 위하여 Cathepsin B inhibitor로 알려져 있는 E64를 5, 50, 100 μM로 조정하여 처 리하여 동결 후 생존성을 조사하였다. 동결 정액을 제조하는 방법은 1단계 동결방법으로 triladyl-egg yolk 희석액을 이용하였으며, 상온에서 신선정액을 50～100×106개/mL 농도로 맞추고, 저온 중탕기법으로 2시간에 걸쳐 상온에서 5℃로 서서히 냉각하였으며, E64가 함유된 2차 희석액으로 1:1로 희석하여 실험군을 준비하였다. 정액의 동결은 스티로폼을 활용한 간이 동결법으로 동결을 실시하였으며, 질소 표면 위 5 cm에서 10분간 노출하고, 액체 질소에 침지하여 동결스트로를 제작하였다. 37℃에서 40초간 융해 후 정자의 생존 성을 조사하였을 때, 정액의 동결성이 우수한 개체에서 대조군은 71.2±2.0%의 생존율을 관찰하였으나, 100 μM E64 처리군은 82±4.3%로 유의적으로 높게 관찰되었다(p<0.05). 5 와 50 μM E64 처리군의 생존율은 77.5±2.0%와 75.0±5.0%로 관찰되어 유의적 차이를 관찰할 수 없었다(p >0.05). 이러한 결과를 근거로 칡소의 동결 보존에 있어서 E64는 동 결정액의 생산성 향상에 도움이 될 것으로 판단되며, 체외수정 및 발생에 관한 영향에 대한 연구결과가 기대되고 있다.