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Porcine 유래 세포주(PK-15)를 이용한 돼지유래 시알산전이효소(ST6Gal1)의 기능 분석

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Sialic acid는 9탄당의 단당류로 당단백질이나 당지질의 당사슬 말단에 존재한다. Sialyltransferase의 활성에 따른 sialic acid의 함량의 변화는 세포의 생존, 분화, 증식등 다양한 방면으로 영향을 미치며 대표적인 당단백질 의약품인 EPO의 경우 말단 sialic acid의 함량은 체내활성이나 반감기와 밀접한 관련이 있다. 따라서 sialytransferase는 다 양한 방면의 연구에서 중요한 효소 중 하나이다. 하지만 돼지에서는 당사슬 관련 연구가 미흡하며 관련 효소들도 아직까지 그 염기서열이나 세포내 기능이 명확하게 알려지지 않 았다. 따라서 이번 연구에서는 기존에 클로닝 된 ST6Gal1을 돼지유래 세포주 PK-15세포 를 이용하여 세포내 기능을 분석하였고, ST6Gal1 단백질의 발현량을 각 조직별로 비교분 석하였다. N-terminal 구역에 Flag-tagging된 pig ST6Gal1을 pcDNA3.1(+) vector에 cloning하여 PK-15 cell에 trasfection하였다. Rea-time PCR과 Western blot을 이용해 효소의 발현을 확인한 후, α2-6 sialic acid를 특이적으로 인지하는 Sambucus nigra agglutinin (SNA)을 사용하여 immunofluoresescence microscopy analysis를 수행하였다. 그 결과, ST6Gal1-transfected cell에서 α2-6 sialic acid의 증가를 간접적으로 확인할 수 있었다. 또 한, adhesion assay를 통해 ECM 기질의 일종인 fibronectin에 대한 부착력이 증가함을 알 수 있었다. 이는 PK-15 cell의 β-integrin에 존재하는 당사슬의 α2-6 sialic acid 함량의 증가와 연관이 있는 것으로 생각되어 진다. 조직별 발현량 분석을 통해서는 간에서 특이 적으로 높은 발현을 보였으며 이는 human, mouse 등의 다른 종들에서의 결과와도 일치 한다. 또한, 자돈(5일)보다는 성돈(24개월령)에서 ST6Gal1의 발현량이 전체적으로 높게 관찰되었다.

저자정보

  • 황환진 농촌진흥청 국립축산과학원, 강원대학교 동물생명공학과
  • 채인순 농촌진흥청 국립축산과학원, 강원대학교 동물생명공학과
  • 정희경 농촌진흥청 국립축산과학원
  • 정은주 농촌진흥청 국립축산과학원
  • 김성우 농촌진흥청 국립축산과학원
  • 정학재 농촌진흥청 국립축산과학원
  • 이휘철 농촌진흥청 국립축산과학원
  • 한덕우 농촌진흥청 국립축산과학원
  • 양병철 농촌진흥청 국립축산과학원
  • 박진기 농촌진흥청 국립축산과학원
  • 박춘근 강원대학교 동물생명공학과
  • 김경운 농촌진흥청 국립축산과학원

참고문헌

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