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정상 및 암 세포주에서의 5-Aminolevulinic Acid에 의해 유도된 Protoporphyrin IX의 형광 검출을 위한 In Vitro 연구

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In Vitro Study of Fluorescence Detection for Protoporphyrin IX Induced from 5-Aminolevulinic Acid in Cancerous and Normal Cells

김명화, 김현정, 이인선, 김경찬, 이창섭

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초록

영어

To clarify the usefulness of fluorescent diagnosis for cancer, We investigated the optimal method of administrating 5-aminolevulinic acid (5-ALA) by analyzing fluorescence signal of Protoporphyrin IX (PpIX) in the cultured normal and cancer cells. 5-ALA was injected as a photosensitizer to the cervico-uterine cancer cell line (HeLa) and in normal liver cells
(Chang). Chang and HeLa cells were incubated with various concentrations of 5-ALA (0-800 ㎍/㎖). The accumulation of PpIX induced by 5-ALA was in HeLa and Chang cells. The cell viability was measured by MTT assay. The optimal concentration of ALA that induced maximum levels of PpIX was 50 ㎍/㎖ in HeLa cell cultured for 24 hours after 5-ALA injection. Fluorescence of PpIX in HeLa cell was excited at a wavelength (λ=410 ㎚) and showed an emission spectrum at
602.3 ㎚, 659.9 ㎚ which could be related to the PpIX generation induced by the applied 5-ALA. The experimental results showed that fluorescence signal of PpIX was proportional to the concentration of 5-ALA in cancer cells, but measured with low concentration in normal cells.

한국어

형광을 이용한 암 진단을 위해 배양된 정상 및 암세포주에 광민감제인 5-ALA를 투여하고 세포 내ㆍ외에서 생성된 Protoporphyrin IX (PpIX)의 형광을 측정하여 5-ALA 투여의 최적농도를 조사하였다. 정상 간세포주 (Chang) 및 자궁경부암 세포주 (HeLa)에 5-ALA를 농도별로 투여하여 ALA에 의해 유도된 PpIX의 생성을 확인하고, MTT assay로 세포생존율을 측정하였다. 배양된 cell에 5-ALA를 투여한 후 24시간 동안 배양함으로써 생성되는 PpIX의 양은 형광의 강도로 측정하였다. HeLa 세포주에 대한 5-ALA의
최적농도는 50 μg/mL이며, 이 때의 형광 (emission) 스펙트럼은 여기 파장이 410 nm일 때 602.3 nm, 659.9 nm에서 형광 봉우리가 관찰되었다. PpIX의 형광 강도를 측정한 결과, PpIX는 정상세포에서는 낮은 농도로 축적이 되는 반면에 암세포에서 더 높은 농도로 축적되었으며, 세포 외보다는 세포 내에서 더 높은 농도로 축적됨을 알 수 있었다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  세포주 및 세포배양
  ALA 용액의 제조 및 처리
  PpIX의 Standard curve 측정
  세포 내ㆍ외의 PpIX 생성 검출
  세포증식률
 결과 및 고찰
  ALA의 세포증식률
  ALA에 의해 유도된 세포 내ㆍ외에서 PpIX의 축적
 요약
 REFERENCES

저자정보

  • 김명화 Myung-Hwa Kim. 계명대학교 화학과
  • 김현정 Hyun-Jeong Kim. 전통미생물자원개발 및 산업화연구센터
  • 이인선 In-Seon Lee. 전통미생물자원개발 및 산업화연구센터
  • 김경찬 Kyung-Chan Kim. 계명대학교 디지털물리학과
  • 이창섭 Chang-Seop Lee. 계명대학교 화학과

참고문헌

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