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개량된 방법에 의한 사람혈소판으로부터 TGF-B 1의 분리

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Purification of TGF-B 1 from Human Platelets by an Improved Method

신충건, 김상국, 문병조, 김평현, 전계택, 남상욱, 김장환, 이종원

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초록

영어

Transforming growth factor B1(TGF-B1) has potentials to be used as a new therapeutic agent. However, studies with TGF-B were hindered by its high cost. In this study, we developed an improved method to purify TGF-B1 from human platelets, for which four purification steps were used: platelet extraction, gel filtration, cation exchange chromatography, and reverse phase high performance liquid chromatography. After a final step of purification, a pure protein with a molecular weight of 25,000 corresponding to the commercially available TGF-B1 was obtained, which were confirmed by silver staining and Western blotting after SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). It was confirmed by the inhibitory effects of TGF-B1 on a mink lung epithelial cell line that the purified TGF-B1 had its biological activity, whose activity is slightly higher than that of the commercially available TGF-B1. About 3.7$[\mug?]purified TGF-B1was obtained from 10 units of concentrated human platelets, the final yield of which is about 21%.

한국어

Transforming growth factor B1(TGF-B)은 여러 가지 생물학적 활성을 가지는 관계로 의학적 치료제로서 사용될 가능성이 크다. 본 연구에서는 혈소판추출, 젤여과, 양이온교환 크로마토그래피 및 역상 HPLC등 네 단계의 정제과정으로 이루어져 있는 정제공정을 이용한 TGF-B1을 값싸고 효울적으로 정제하였다. 이 과정을 거쳐 최종적으로 얻어진 TGF-B1은 비환원조건하에서 SDS-PAGE를 행한 결과 구매된 TGF-B1 표준품과 일치한 위치에서 한 개의 band가 관찰되어 순수하다는 것을 확인하였으며 또한 이것이 Westem blot를 통하여 TGF-B1 항체와 결합하는 것으로부터 TGF-B1임을 확인하였다 또한, mink lung epithelial cell line 을 이용한 성장저해 실험을 통해 정제된 TGF-B1이 구매되TGF-B1 표준품보다 조금 높은 활성을 가지는 것을 확인하였다 최종적으로 농축혈소판 10단위로부터 약 3.7g의 정제된 TGF-B1이 얻어져 그 최종수율은 약 21%였다.

목차

서론
 재료 및 방법
  재료 및 장비
  협소판의 추출
  젤여괴 크로마토그래피
  양이온교환 크로마토그래피
  역상 HPLC 크로마토그래피
  TGF-B1의 생물학적 활성측정
  TGF-B1의 순도 측정
  TGF-B1의 Western blot assay
  Sandwich ELISA를 이용한 TGF-B1의 정량
 결과
  혈소판으로부터 단백질의 추출
  젤여과 크로마토그래피를 이용한 TGF-B1의 정체
  양이온교환 크로마토그래피를 이용한 TFG-B1의 정제
  역상 HPLC를 이용한 TGF-B1의 정제
  각 정제단계에서의 분리능 및 수율
  각 정제단계에서의  TGF-B1의 항원성 및 안정성
  정제된 TGF-B1의 생물학적 활성측정
 고찰
 요약
 참고문헌

저자정보

  • 신충건 Zhong-Jian Shco. 경북대학교 자연과학대학 생화학과
  • 김상국 Sang Kook Kim. 경북대학교 자연과학대학 생화학과
  • 문병조 ByungJo Moon. 경북대학교 자연과학대학 생화학과
  • 김평현 Pycung-Hycun Kim. 강원대학교 자연과학대학 생명과학부
  • 전계택 Gie-Taek Chun. 강원대학교 자연과학대학 생명과학부
  • 남상욱 Sang Uk Nham. 강원대학교 사범대학 과학교육학부
  • 김장환 Jang-Hwan Kim. 대구효성카톨릭대학교 의과대학 생화학교실
  • 이종원 Jongwon Lee. 대구효성카톨릭대학교 의과대학 생화학교실

참고문헌

자료제공 : 네이버학술정보

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