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영어

Hydrogen sulfide (H2S) is a by-product of metabolism of amino acids including sulfur and alcoholic fermentation, it is generally thought of in terms of a poisonous gas. Though H2S can have a negative impact on the perceived quality of fermented drinks due to an undesirable aroma, it plays prominent roles as a neuromodulator in the mammalian brain as well as a
smooth muscle relaxant. Nowadays studies on the proteins which produce H2S are carried out in various fields such as structure, function, and metabolism. Here we propose to develop a simple and rapid H2S forming assay method, which will lead to speed up preparing the H2S forming proteins for identification by MALDI-TOF MS analysis. We detected three kinds
of proteins which produce H2S in the crude extract of Saccharomyces cerevisiae. Those proteins were cystathionie β-synthase, O-acetylserine sulfhydrylase, and cystathionine γ-lyase.

한국어

생체에서의 황화수소는 의약 분야와 발효 산업에 있어서 중요한 역할을 하고 있다. 본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae을 이용하여 기질인 L-cysteine과 β-mercaptoethanol로 부터 β-replacement 반응에 인한 황화수소를 발생시킬 수 있는 효소를 간편하고 신속하게 동정하는 방법의 확립을 목적으로 하였다. 효소에 의해 발생된 황화수소와 Pb-acetate의 반응으로 생성된 Pb-S를 gel상에서 간편하게 확인한 후, 확인된 단백질들을 이온 교환컬럼를 수행한 후 gel에서 추출하는 방법으로 MALDI-TOF MS의 시료를 간단히 얻을 수 있었다. PMF 방법과 MS/MS ion search 분석을 통해 간편하게 효모에서 황화수소를 형성할 가능성이 있는 세가지 단백질의 동정에 성공하였다. 이 세 가지
단백질은 CYS3, CYS4, MET17 유전자의 단백질로서 cystathionine γ-lyase, CBS, OASS 임이 밝혀졌다. 그리고 이 세 단백질들은 L-cysteine과 β-mercaptoethanol의 존재하에서 황화수소를 실제로 생성함을 확인하였다. 본 연구에서 표적의 물질을 생산하는 단백질들을 젤상에서의 활성측정과 MALDI-TOF MS를 이용하여 간단히 그리고 정확하게 동정하는 방법을 확립하였다.