원문정보
Development of an Open Sandwich Fluoroimmunoassay Based on FRET
초록
영어
We have developed a sensitive, one-step, homogeneous open sandwich fluoroimmunoassay (OsFIA) based on fluorescence resonance energy transfer (FRET) and luminescent semiconductor quantum dots (QDs). In this FRET assay, estrogen receptor-β (ER-β) antigen was incubated with QD-labeled anti-ER-β monoclonal antibody and AF (Alexa Fluoro)-labeled
anti-ER polyclonal antibody for 30 minutes, followed by FRET measurement. The dye separation distance was estimated to be between 80~90 Å. The present method is rapid, simple and highly sensitive, and did not require the bound/free reagent separation steps and solid-phase carriers. A concentration as low as 0.05 nM (2.65 ng/ml) receptor was detected with linearity (R2 > 0.990). In addition, the assay was performed with commercial antibodies. This assay provides a convenient alternative to conventional, laborious sandwich immunoassays.
한국어
QDs을 기반으로 하는 OsFIA는 매우 빠르고 간단히 수행될 수 있다. 또한 이 분석법은 고체상의 담체나 결합/잔류시약의 분리 등과 같은 여러 과정을 필요로 하지 않으며, 적은 양의 시약으로도 분석이 가능하다. 본 분석법은 높은 감도로 항원을 측정할 수 있으며, 일상적인 분석에도 쉽게 도입될 수 있을 것이다. 선형 범위 내에서 측정 가능한 receptor의 최소농도는 0.05 nM (2.65 ng/mL) 정도이다. 또한, 일반적으로 상용화된 항체를 가지고 수행이 가능하다. 이 OsFIA 분석법은 기존의 실험적 sandwich immunoassay의 효과적인 대안으로 제시된다.
목차
서론
재료 및 방법
Anti-estrogen receptor β (ER-β) monoclonal antibody(McAb)에의 QD 565 표지
Anti-ER polyclonal antibody (PcAb)에의 Alexa Fluordyes의 표지
Open sandwich FRET (fluorescence resonance energytransfer) 기반 면역분석법 (OsFIA)
형광현미경을 이용한 FRET 관찰
결과 및 고찰
QD565와 Alexa Fluor 568/633의 분광학적 특성
반응 시간 및 농도
QD과 Alexa Fluor 사이에서의 FRET
Receptor의 농도 대 FRET
고찰
요약
REFERENCES