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다공성 콜라젠 미립담체를 이용한 부착성 동물세포 Vero-6의 배양

원문정보

The Cultivation of Anchorage-Dependent Animal Cell, Vero-6, on Macroporous Collagen Microcarrier

최연수, 최태부, 박정극

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초록

영어

The comparison of the capabilities of cell growth of four different kinds of commercially available microcarriers was carried out by culturing anchorage-dependent animal cells, Vero-6, in a spinner flask. Using 3 g/l of Cytodex 3, the maximum final cell density was about 1.4x106 cells/ml and increased up to 2.0x106 cells/ml by increasing microcarrier concentration up to 5 g/l. The macroporous collagen microcarriers, VX-100, informatrix, and Cultispher-G showed the final cell concentration of 4x106 cells/ml, 2.1x106 cells/ml, and 3.2x106 cells/ml, respectively at the microcarrier concentration of 5g/1. According to this result, VX-100 showed better cell growth than informatrix and cultispher-G and also showed about 2 fold increase in final cell density comparing to Cytodex 3 solid bead. When the intermittent bead-to-bead transfer technique was introduced in the culture using Cytodex 3 bead and cultispher-G, the result was very successful and the cells grew out very well. The recovered cells by dissolving collagen microcarrier using collagenase enzyme were mostly viable and grew out very well on the surface of the fresh microcarriers

한국어

현재 상품화되어 시판되고 있는 4가지의 미립담체를 이용해 각각의 성능을 비교하기 위하여 부착성동물세포배양 실험을 수행한 결과를 요약하면 다음과 같다. Cytodex 3의 경우 세포의 초기 접종농도를 약 2.0x105 cells/ml로 하였을 때, 3g/l는 약 1.4x106 cells/ml, 5g/l는 약2.0x106 cells/ml의 최종세포밀도를 얻을 수 있었다. 또한 bead-to-bead trandsfer 실험을 한 결과 3g/l를 간헐적으로 첨가하였을 때는 약 1.9x106 cells/ml, 5g/l 첨가하였을 때는 약 3.0x106 cells/ml까지 최종세포밀도가 증가하였다. Cultispher-G, 3g/l를 이용해 초기 접종농도를 약 4.0x105 cells/ml로 하여 배양하였을 때 약 cells/ml까지 세포농도가 증가했고, 5g/l를 이용해 초기 접종농도를 4.0x105 cells/ml로 접종하였을 때 최종세포농도가 약 3.2x106cells/ml까지 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 그리고 bead-to-bead transfer배양 실험결과에서 3g/l의 미립담체를 간헐적으로 첨가해 약 cells/ml까지 최종세포밀도가 올라갔고 5g/l를 간헐적으로 첨가하였을 때1.8x106 cells/ml까지 세포밀도를 얻었다. VX-100을 사용하여 세포를 배양하였을 때 초기 접종농도가 약 2.0x105 cells/ml에서 최종세포밀도가 약 4.4x106 cells/ml까지 증가하는 것을 알게 되었다. 따라서 실험에 사용한 다른 종류의 다공성 젤라틴 bead보다 성능이 우수함을 알 수 있었고 Cytodex-3보다는 최종세포농도가 약 2배이상 증가한 결과를 얻었다. Informatrix bead는 초기 접종농도를 약 3.0x105cells/ml로 하였을 때 최종세포밀도가 약 2.1x106cells/ml까지 증가하였다. Collagenase효소를 이용하여 젤라틴 bead를 녹인 후 회수한 세포는 대부분 viable하였고 새로 도입된 bead에 성공적으로 부착하여 성장하였다. 따라서 담체 내부에서 자라는 세포도 회수하여 재사용 할 수 있게 되었다.

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법 
  Cell line
  미립담체(Microcarrier)
  배지(Medium)와 혈청(Serum)
  Cell Inocluation
  Nuclei counting method
  Enzyme(collagenase)을 이용한 Cell count
  Bead-to-bead transfer 방법을 이용한 배양
 결과 및 고찰
  Cytodex-3를 이용한 세포배양
  Cultispher-G를 이용한 세포배양
  VX-100을 이용한 세포배양
  최종세포밀도 측정
  Informatrix bead를 이용한 세포배양
  회수한 세포의 재접종
 요약
 감사
 참고문헌

저자정보

  • 최연수 Yeon-Soo Choe. 동국대학교 공과대학 화학공학과
  • 최태부 Tae-Boo Choe. 건국대학교 공과대학 미생물공학과
  • 박정극 Jung-Keug Park. 동국대학교 공과대학 화학공학과

참고문헌

자료제공 : 네이버학술정보

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