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영어

Ferritins are heteropolymers composed of H- and L-chains with a variable ratio. The H-chain ferritin is better for iron uptake, oxidation and physical stability than L- chain ferritin. Therefore, in this study the expression of H-chain ferritin in recombinant E. coli at 37o C led to the accumulation of recombinant ferritin. An insoluble form of ferritin was separated from disrupted
cells, followed by various primary separation steps with two kinds of buffers. Collected samples from the steps were purified by DEAE-cellulose gels packed in a column. The fractions from the DEAE column were assayed to obtain the amount and the purity of ferritin by using RP-and GF-HPLC.

한국어

재조합 대장균을 진탕 배양 시 37℃, 200 rpm에서 총 배양 시간을 16시간 이하로 했을 때 훼리틴의 최대발현을 유도할 수 있었다. 재조합 대장균에서 발현된 훼리틴은 불용성인 cell debris에 존재하는데, WB. B(50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1.0 mM EDTA, 1.0 M or 4.0 M Urea)와 D.W에 의해 cell debris에 붙어 있는 훼리틴이 용해되었다. 전처리를 수행함에 있어서는 매 단계마다 충분한 교반과 4℃에서 어느 정도(12시간 이상) 방치 후에 실험(debris에 붙어 있는 훼리틴이 용매에 녹아 나오는 시간 제공)해야 더 많이 용해된 훼리틴을 얻을 수 있었다. 훼리틴은 열에 안정하다는 것을 이용하여 오염물질을 제거할 수 있는데 70℃에서 20분 동안 열처리를 수행하였다. 열처리된 샘플을 IEC를 통하여 순도가 높은 훼리틴을 정제할 수 있었으며, 정제된 훼리틴이 다양한 분자량의 다량체로 존재함을 RP-HPLC와 GF-HPLC를 이용하여 확인하였다.