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영어

A serum-free media for CRIP/MFG-LacZ retrovirus production was developed and applied to continuous packed-bed culture system. The serum-free media developed by fractional factorial design contains insulin (10 μg/mL), transferrin (5 μg/mL), BSA (4 mg/mL), EGF (25 ng/mL), and linoleic acid (10 μg/mL). Operation of continuous packed-bed reactor using Fibra-cel enabled the packaging cell to stably maintain retrovirus titer for about 1 week. The optimal operation conditions for dilution rate and temperature were 0.67(h-1) and 32℃, respectively. Using this media, the retrovirus titer(cfu/mL) in the packed continuous culture was about 50% that of continuous culture with serum containing DMEM media.

한국어

본 연구에서는 레트로바이러스 생산 세포인 CRIP/LacZ 세포의 배양시에 혈청의 역할을 대체할 수 있는 여러 첨가물을 선정하고 그 농도를 정하는 실험을 수행하여, 레트로바이러스 생산을 위한 무혈청 배지를 개발하였다, 그 결과 DMEM을 기본배지로 하고 insulin, transferrin, BSA, EGF and linoleic acid를 포함한 무혈청 배지를 개발하였다. 이를 충전층 연속배양기를 이용한 레트로바이러스의 연속생산 실험에 본 결과 6-7×104 cfu/mL서 수율을 가진 레트로바이러스를 약 8일간 생산할 수 있었다. 충전층 연속반응기에서도 T-flask와 같이 온도의 영향이 매우 중요하였고 32℃에서 가장 높은 수율의 레트로바이러스를 생산할 수 있었다. 이는 레트로바이러스의 온도에 따른 비활성속도가 바이러스 생산수율에 매우 큰 영향을 미침을 시사해 주는 결과이다. 또한 충전층 배양기에서 무혈청배지를 이용한 세포배양 시에는 무혈청배지 첨가물로 세포 부착 물질에 대한 연구가 필요하다고 생각된다.