earticle

영어

The factors affecting the back-extraction efficiency of Bovine Serum Albumin (BSA, Mw. 65kDa, pI 4.9) solubilized in an AOT reverse micellar solution, prepared by the injection method, to an excess aqueous phase were investigated. In particular, the effects of pH, the types of salts, alcohols added as cosurfactants, and their concentrations in the aqueous phase were examined. Furthermore, by comparing the CD spectra of the back-extracted BSA and the feed
BSA, the structural changes of BSA during the extraction process were determined. The addition of 1:1 salt such as KCl or NaCl to the aqueous phase resulted in almost a 100% extraction to the aqueous phase at a pH higher than its isoelectric point pI. This high efficiency of back-extraction might be due to the change in the interactions between the protein and micellar aggregates driven by the added salt. For 1:2 salts like CaCl2 and MgCl2, BSA was back-extracted
with lower than 20% extraction efficiency. Maximum extraction efficiencies were attained at about pH=7 and pH=8 for monovalent and divalent salts, respectively. The addition of alcohols as cosurfactants led to an improvement in back-extraction efficieny. From the CD spectra of BSA extracted to the aqueous phase, it was observed that denaturation of BSA was not significant. In certain back-extraction conditions, the extracted BSA showed even higher activity than the feed BSA.

한국어

주입법을 이용하여 AOT 역미셀 용액에 가용화된 BSA를 과잉 수용액으로 역추출할 때 효율에 영향을 미치는 요인들에 대하여 조사하였다. 특히 수용액의 pH, 수용액에 가한 염의 종류와 농도, 알코올의 종류에 따른 영향을 검토하였다.
더하여, 역추출된 BSA의 CD 스펙트럼을 원래의 BSA의 CD스펙트럼과 비교하여 추출공정 중에 발생하는 구조적 변화를 결정하였다. KCl이나 NaCl과 같은 1:1염을 수용액에 첨가하면 BSA의 등전점 이상의 pH에서는 거의 100% 역추출 효율을 보였다. 이것은 첨가된 염에 의하여 유발되는 역미셀과 단백질 간의 전기적 상호작용의 변화에 기인한 것으로 추측된다. CaCl2과 MgCl2와 같은 1:2염의 경우에는 20% 이하의 역추출 효율을 보였다. 1가 염과 2가 염의 경우 각각 pH=7과 pH=8에서 최고의 효율을 보였다. 표면활성시약으로써 알코올을 첨가하는 경우에는 역추출 효율이 향상됨을 보였다.
과잉 수용액으로 추출된 BSA의 CD 스펙트럼으로부터 추출공정 중에는 특이할 만한 구조적 변성은 관찰되지 않았으며, 특정된 추출조건에서는 원래의 단백질 보다 높은 활성을 보이기도 하였다.