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영어

An oxygen-sensitive fumarate reductase has been purified from the cytosol fraction of the Enterococcus faecalis RKY1, grown anaerobically on a defined medium containing glycerol and fumarate. A major portion of the purification was performed with employing Triton X-100 and reducing agents by Phenyl-sepharose CL-4B, DEAE-sepharose, and Sephadex G-150. The final
activity was 0.42 unit/mg. The deduced molecular mass of active band was 66 kDa. The optimal pH and temperature for the activity were 7.0 and 38℃, respectively. The enzyme activity was not affected by 1mM metal ions such as BaCl2․2H2O, HgCl2, MnCl2․4H2O, ZnCl2, CuCl2․2H2O, MgCl2․6H2O, FeSO4․7H2O, and by EDTA. Partially purified enzyme was yellow in color; spectroscopic study indicated the presence of flavins as a cofactor.

한국어

본 연구에서는 고수율로 fumarate를 succinate로 생물 전환하는 통성박테리아 Enterococcus faecalis RKY1이 생산하는 fumarate reductase의 특성을 조사하였다. 세포막에 결합된 단백질을 추출하기 위하여 Triton X-100을 이용하여 가용화시켰으며 Phenyl-Sepharose CL-4B, DEAE-Sepharose CL-6B, Sephadex G-150의 column chromatography를 이용하여 부분 정제하였다. 활성 단백질의 크기는 66 kDa으로 추정되었다. 혐기적으로 배양한 세포로부터 얻은 효소이므로 공기 중에 장시간 노출시 활성이 감소하였다. 이를 보완하기 위하여 1 mM DTT, 2-mercaptoethanol을 첨가하여 활성 손실을 최소화 하였다. Fumarate reductase의 최적pH 및 온도는 각각 7.0과 세포의 최적 배양온도인 38℃였다. 각
종 금속이온의 결과를 조사한 결과 활성 저해를 받지 않았으며, 특히 다른 미생물에서 분리된 효소와는 달리 Cu2+와 같은 금속이온에 대해서 영향을 받지 않았다. 부분 정제된 효소는 노란색을 띄었으며 465 nm에서 최대 흡수파장을 나타내었고 flavin이 보조인자로서 결합되어 있음을 확인하였다.