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배경 : Bcl-2 family 단백질은 세포사멸을 조절하는 데 중요한역할을 한다. 인체에서 현재까지 20여가지 이상의 Bcl-2 family가 알려지고 있다. Bfl-1은 Bcl-2 family member 중 하나로서여러 가지 세포주에서 세포사멸을 지체시키는 것으로 알려지고있으나 Bfl-1의 명확한 기능은 아직알려지지 않았다.방법 :Bfl-1의 기능을 분석하기 위하여 yeast two-hybrid sys-tem을 적용하여 Bfl-1과 결합할 수 있는 단백질을 확인하였다.GST pull down assay를 이용하여 Bfl-1과 IKK- 의 결합 반응을 확인하였다. 12가지의 IKK- deletion mutant와 5가지의Bfl-1 deletion mutant를 제조하여 Bfl-1과 결합하는 데 필요한IKK- 의 부위를 결정하였다.결과 : Bfl-1은 IKK- (IKK complex의 단위분자이면서 NF-B관련 신호전달에 중요한 역할을 함)의 C 말단 부위와 결합하였다. 또한 IKK- 의 673에서 745의 잔기가 Bfl-1과의 결합에 중요하였고, Bfl-1의 1에서 484의 잔기(Bcl-2 유사 부위 BH1, BH2,BH3, BH4 포함)가 IKK- 결합에 필수 적이었다. 결론 : IKK- 의 C말단은 Bfl-1의 결합파트너로서 여러 개의 serine잔기를 함유하고 있다. 본 연구의 결과를 미루어보면 IKK-와 Bfl-1과의 결합은 NF- B활성조절에 중요한 역할을 할 것으로 사료되었다. NF- B활성 신호 조절에 관련된 IKK 와 Bfl-1간의 기능을 좀 더 연구하기 위해서는 추가연구가 필요하다
Background : Bcl-2 family proteins play a central role in regulating apoptosis. In human, over 20 members of this family have been identified to date. Bfl-1, a member of the Bcl-2 family, has been known to retard apoptosis in various cell lines. However, the function of Bfl-1 remains unclear. Methods : In order to investigate the Bfl-1 function, we employed yeast two-hybrid system to identify the proteins which are capable of interacting with Bfl-1. The interaction of inhibitor kappaB kinase- (IKK- ) and Bfl-1 was confirmed using glutathione S-transferase pull down assays. To determine which regions of IKK- were required for interaction with Bfl-1, we constructed 12 deletion mutants of IKK- and 5 deletion mutants of Bfl-1. Results : Bfl-1 interacted with the C-terminal region of IKK- which is a subunit of IKK complex, and IKK- activity is very important in the NF- B related pathway. In addition, the amino acids 673- 745 of IKK- were important for Bfl-1 interactions, and amino acids 1-484 of Bfl-1, including Bcl-2 homology domains (BH1, BH2, BH3, BH4), were crucial for IKK- interactions. Conclusions : IKK C-terminus contains many serine residues as binding partner of Bfl-1. Our results suggested that Bfl-1 is involved in the NF- B activation through interaction of IKK- and Bfl- 1. Further studies need to be performed to understand functions of the IKK- and Bfl-1 associated with the regulation of the NF- B activation pathway.
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Bfl-1, IKK- yeast two hybrid, BH domain
